PEI轉染試劑由納米高分子聚合物組成，分子內(nèi)含有許多氨基，在生理PH下會發(fā)生質子化，這些質子化的氨基可以中和DNA質粒表面的負電荷，使DNA分子由伸展結枸壓縮為體積相對較小的DNA粒子，并包包裹在其中，使DNA免受核破醇的降解。轉染復合物主要是通過細胞內(nèi)吞作用將DNA轉移進入細跑，形成內(nèi)合體，DNA從內(nèi)會體釋放，進入細胞質中，再進一步進入核內(nèi)轉錄、表達。通過納米技術生產(chǎn)出的PEI轉染試劑在納米尺度表現(xiàn)出結合保護DNA能力強、毒性低的*性能。
1、質粒質量：請務必使用高純度無內(nèi)毒素轉染級質粒。通過260nm光吸收測定DNA 濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。
2、細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細胞。
3、細胞培養(yǎng)液要求：PEI轉染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉染，并且轉染前不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。確保細胞培養(yǎng)液沒有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時培養(yǎng)液中不添加抗生素。
4、DNA濃度和PEI轉染試劑量的優(yōu)化：DNA濃度和轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，初次使用應優(yōu)化DNA濃度和轉染試劑量以得到大的轉染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用1～4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。DNA和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2~1:5。
